豬肌細胞生成素基因的多態(tài)性對荷包豬肉質的影響研究

　　關鍵詞：荷包豬；MyoG基因；PCR-SSCP分析；肉質

　　荷包豬是東北民豬的一種，主要分布在遼寧、吉林和黑龍江3省。全身黑色，冬季生絨毛，鬃毛質量好，體質強健。面長直，耳大下垂。背膘平或微凹，胸深，四肢粗壯，臥系。后軀狹窄，傾斜。抗寒能力強，適應性強，耐粗飼，善奔跑，常年發(fā)病率低，肉質鮮美。

　　肌細胞生成素（Myogenin，MyoG）是調節(jié)骨骼肌發(fā)育的重要因子，MyoG是生肌決定因子（Myogenin determination gene，MyoD）基因家族的成員之一。而生肌決定因子MyoD（也稱肌肉調節(jié)因子muscle regulatory factory，MRF）基因家族編碼4個明顯不同的肌肉特異性轉錄因子：MyoD、MyoG、Myf5和MRF4，他們代表著控制骨骼肌生成很多方面的關鍵調節(jié)因子。其中，MyoG基因是MyoD 基因家族中唯一在所有骨骼肌細胞系中均可表達的基因，起到關鍵調節(jié)的作用。目前，國外對豬MyoG基因的多態(tài)性進行了較多研究，例如，Ernst等（1998）首先分析了豬MyoG基因的遺傳變異，他們發(fā)現(xiàn)長度為4.9kb和4.2kb DNA片段為多態(tài)性片段，又在4個二代家系和三代家系中發(fā)現(xiàn)含4.9kb和4.2kb片段的MyoG等位基因分離符合孟德爾分離定律。對8個品種無親緣關系的83頭豬的MyoG等位基因的頻率進行檢測，發(fā)現(xiàn)含4.9kb和4.2kbDNA片段的MyoG等位基因出現(xiàn)頻率分別為0.42%和0.58%。TePas等（1996）發(fā)現(xiàn)MyoG基因有3個變異位點：一個為梅山豬所特有，一個為荷蘭長白豬和杜洛克豬所特有，另一個為所有研究的豬種共有的變異位點；初步研究表明這些變異位點與豬初生重、肌纖維數(shù)有關。近些年來，隨著對豬MyoG基因的研究的不斷深入，已經(jīng)取得了一些新進展。MyoG基因作為改善豬肉類品質重要的候選基因，我們有必要對其進行深入研究。

　　1 材料與方法

　　1.1 材料

　　本試驗所用優(yōu)質純種荷包豬和長白豬均由葫蘆島市建昌縣民盛荷包豬養(yǎng)殖場提供。采用耳靜脈采血。所有的試驗豬均采血2mL左右。將血液放入有10%EDTA抗凝的離心管中并分別編號。采用PCR-SSCP技術分析，對所有試驗豬進行MyoG基因型的檢測，然后選取體重大約在75kg的各個基因型純種荷包豬進行試驗。

　　1.2 引物的設計

　　本次試驗引用（Ann Soumillion，等，1996）年設計的引物，由沈陽寶泰克生物工程有限公司合成提供。引物序列為：

　　引物1，R1:5’-GGA ATT CCA TGG AGC TGT ATG AAC ATC-3’

　　F2:5’-TCC GGC TCC TCC CTG GTT GA-3’

　　引物2，R1:5′-TCA GGA AGA ACT GAA GGC TG-3′

　　F2: 5′-GTT TCC TGG GGT GTT GC -3’

　　1.3 PCR-SSCP 分析

　　PCR擴增體系50μL。擴增條件：預變性溫度為93℃、3min。變性93℃、35S，退火溫度為61℃、30S。72℃延伸30S。

　　取PCR產(chǎn)物，加入變性劑、石蠟油，煮沸5min，取出立刻放入冰浴中8min以上，再全部上樣，10～15℃（具體溫度依試驗而定，不能太高）下電泳。開始在220V電壓下電泳10min，然后在140V（電壓不能高于120，否則有可能使條帶跑彎）電泳12h，取下凝膠，進行銀染，最后進行數(shù)碼照相。

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　　　2 試驗結果

　　2.1 PCR擴增結果

圖1 MyoG exon1-1（1）的PCR擴增結果（bp）

圖2 MyoG exon1-1（2）的PCR擴增結果（bp）

　　2.2 PCR-SSCP的檢測結果

圖3 MyoG SSCP的檢測結果

　　　圖3中，PCR擴增產(chǎn)物的SSCP檢測結果：4、6、7、10為AA基因型；1、2、5、8為AB基因型；3、9為BB基因型。

　　2.3 結果統(tǒng)計

　　由表1可知，MyoG基因的多態(tài)性對荷包豬滴水率的影響未到達顯著效果（P>0.05）。

　　對嫩度的影響達到了顯著水平（P<0.05）。AA型基因的嫩度值最大，AB型基因的嫩度最小，BB型基因的嫩度介于兩者之間。

　　在對大理石紋方面的影響上沒有達到顯著水平（P>0.05）。在肌內脂肪方面其影響達到了顯著水平（P<0.05），AB型基因的荷包豬肉中其含量最高比AA型基因和BB型基因的含量分別高出了0.16%和0.29%。

　　對pH值的影響，MyoG基因的多態(tài)性對45min時pH值的影響沒有達到顯著水平（P>0.05）。但是對24h時的pH值的影響達到了顯著效果（P<0.05），但是均在正常值的范圍之內。表1 MyoG基因的多態(tài)性對荷包豬肉質的影響

　　注：同行肩標注不同小寫字母表示差異顯著（P＜0.05），標有相同字母表示差異不顯著（P＞0.05）。下同。

由表2分析可以得出，在纖維面積、纖維直徑和肌纖維密度方面，AA型基因、AB型基因和BB型基因的荷包豬肉3者之間都達到了顯著水平（P<0.05）。

表2 MyoG基因的多態(tài)性荷包豬肌纖維組織學結構的影響

　　3 討論

　　3.1 MyoG基因的多態(tài)性

　　本次試驗選用了荷包豬和長白豬為對象，通過PCR-SSCP進行MyoG基因多態(tài)性分析，結果在外顯子Ⅰ片段內出現(xiàn)多態(tài)性，結果同Soumillion等（1997）用PCR-RFLP方法進行MspⅠ酶切，共發(fā)現(xiàn)了3個位點相同。

　　3.2 MyoG基因對豬肉質指標的影響

　　滴水率是反映豬肉系水力的指標，是度量不加任何外力豬肉的液體流失狀況。由試驗結果可以看出AB型基因荷包豬的滴水率明顯低于其他兩種，這說明AB型基因荷包豬肉的保水能力強。目前對豬肉嫩度的研究發(fā)現(xiàn)，品種和遺傳因素對肉的嫩度影響很大。我國地方豬種肉質優(yōu)良、肌纖維較細，肌內脂肪一般含量在3%以上，甚至在6%～7%，肉質鮮嫩、多汁，而外來品種由于對瘦肉率的過度選擇已使肌內脂肪含量下降為1%～1.5%，遠遠低于最佳范圍，因此肉質較粗糙。本次試驗的結果也同樣證明了地方豬種荷包豬的嫩度比引進豬種長白豬的嫩度好，且均達到了顯著水平。最嫩的都為AB型的豬。肌內脂肪的含量直接影響著肉的嫩度和大理石紋，肌內脂肪荷包豬中含量最高的為AB型，這說明不相同基因在同豬種中作用有所區(qū)別，在大理石紋方面MyoG基因的多態(tài)性對荷包豬肉的影響沒有達到顯著水平。

　　pH值是作為評價劣質肉的標準（曾勇慶等，1990）。MyoG基因的多態(tài)性對肉45min時的pH值的影響不大，荷包豬沒有達到顯著的水平。但是對24h時的pH值的影響均達到了顯著的水平，但是均在正常范圍之內。因此，說明MyoG基因的3種基因對pH值的影響不大。

　　根據(jù)以往的一些研究表明，肌纖維越細豬的肉質越嫩（羅軍，1989）。很多研究表明，我國的地方豬種肌纖維直徑比引進豬種要細，因此，地方豬種的肉的嫩度較引進豬種要好。（楊博輝等，2001）分別對九龍牦牛和大通牦牛肌肉纖維直徑進行研究，發(fā)現(xiàn)肌纖維直徑與肉品的柔嫩度呈現(xiàn)曲線相關。

　　3.3 MyoG基因對豬肉肌纖維組織學結構的影響

　　本次試驗在荷包豬肉中纖維面積最大的為BB型，且3者之間達到了顯著水平；纖維直徑最大為AB型，3者達到顯著水平；肌纖維密度最大的為BB型荷包豬，3者之間也達到了顯著水平，且荷包豬肉的纖維直徑和纖維面積均小于長白豬，更加說明了荷包豬的肉質嫩度好于引進豬種長白豬的。